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El blog de fergonpacheco

Tecnicas basicas...

9 Julio 2009 , Escrito por fergonpacheco

 

 

CICLO DEL CRECIMIENTO POBLACIONAL

Si analizamos el crecimiento microbiano en el tiempo, éste describe una típica curva de crecimiento que puede ser dividida en fases distinguibles. La curva de crecimiento puede dividirse en diversas fases: fase lag, fase exponencial, fase estacionaria y fase de muerte.

Fase lag o de retraso

Cuando una población microbiana es inoculada en medio fresco, el crecimiento generalmente no principia de inmediato sino después de un cierto tiempo, llamado fase lag que puede ser breve o largo, dependiendo de las condiciones. Si un cultivo que crece exponencialmente es inoculado al mismo medio bajo las mismas condiciones de crecimiento no se observa la fase lag y el crecimiento exponencial continúa a la misma velocidad. Sin embargo, si el inóculo se toma de un cultivo viejo (fase estacionaria) y se inocula en el mismo medio, generalmente se presenta la fase lag, aún cuando las células del inóculo estén vivas. Esto se debe a que las células generalmente agotan diferentes coenzimas esenciales u otros constituyentes celulares y se requiere de cierto tiempo para su resíntesis. Un retraso también se presenta cuando el inóculo está formado por células dañadas (pero, no muertas) por tratamientos con calor, radiación o sustancias químicas, debido al tiempo necesario para que las células puedan reparar dicho daño. También se observa cuando una población se transfiere de un medio de cultivo rico a uno pobre. Esto sucede debido a que para que continúe el crecimiento en un medio de cultivo en particular, es necesario que las células tengan un complemento íntegro de enzimas para la síntesis de los metabolitos esenciales que no están presentes en dicho medio.

Cuando se les transfiere a un medio diferente, se requiere cierto tiempo para la síntesis de nuevas enzimas Es una fase de preparación y adaptación al medio, su duración depende del medio de cultivo y el estado fisiológico de las células vivas

 

 

 

 Fase exponencial

Es una consecuencia del hecho de que cada célula se divide para formar dos células, cada una de las cuales también se divide para formar dos células más y así sucesivamente. La mayor parte de los organismos unicelulares crecen exponencialmente. La velocidad de crecimiento exponencial varía mucho de un organismo a otro. Por ejemplo: Salmonella typhi crece muy rápidamente en cultivo, con un tiempo de generación de 20 – 30 ‘, Mycobacterium tuberculosis, crece muy lentamente, con sólo una o dos duplicaciones por día. Las condiciones ambientales, T°, composición del medio de cultivo, afectan a la velocidad de crecimiento exponencial así como las características del microorganismo.

En general, las bacterias crecen con mayor rapidez que los organismos eucariotas y los eucariotas pequeños se desarrollan más aprisa que los grandes Cada célula que se divide en dos. La tasa de crecimiento es exponencial.

 Fase estacionaria

El crecimiento exponencial se detiene, los nutrientes indispensables se agotan, no hay incremento o decremento en el número de células o masa, hay limitación de nutrientes y acumulación de sustancias tóxicas. Los microorganismos son fisiológicamente activos y viables. En un sistema cerrado no se puede llevar a cabo indefinidamente el crecimiento exponencial

 Fase de muerte

Si la incubación continúa después que una población alcanza la fase estacionaria, las células pueden seguir vivas y continuar metabolizando, pero lo más probable es que mueran. Si esto último sucede, la población se encuentra en la fase de muerte. Durante esta fase, el conteo microscópico directo puede permanecer constante pero la viabilidad disminuye lentamente. En algunos casos, la muerte se acompaña por lisis celular, dando lugar a una disminución del conteo de viabilidad.

MEDIDA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Se mide por cambios sucesivos en el número de células o por el peso de la masa de las células. Existen varios métodos para contar las células o estimar la masa de éstas.

A) Recuento de células

1) Conteo de células al microscopio
Se emplea un dispositivo graduado con 25 cuadrados cuyo volumen y área es conocido. Ej.: Cámara de Petroff-Hausser, cámara de Neubauer, hemocitómetro

Limitaciones: - Es muy tedioso, no es práctico para uun gran número de muestras
- No es muy sensible, se necesitan al menos 106 bact/ml para que sean observadas al microscopio
- No distinguen células vivas de muertas

Una célula viable es definida como aquélla que es capaz de dividirse y formar una colonia en el medio de cultivo. El conteo en placas es el método más utilizado. Pueden ser:

Diseminación en placa (siembra en placa por extensión).-

Se asume que cada colonia surgió de una simple célula, contando el número de colonias uno puede calcular el número de células viables en la muestra.

Método de vaciado en placa.-

 

B) Medida de la masa celular

En muchos estudios es necesario determinar el peso de las células más que el número.

1) Peso seco

Se determina el peso seco o peso húmedo de una alícuota de la población separada por centrifugación. El peso seco es por lo general el 20-25 % del peso húmedo.

2) Turbidimetría

A través de un colorímetro o espectrofotómetro midiendo la turbidez en unidades de absorbancia. Debe prepararse curva estándar para cada organismo estudiado.

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raquel 08/11/2010 16:50


no tiene fuente bibliograsfica este artuculo, necesito alguna referencia.gracias